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        鉛中毒大鼠幾種血清酶活性逆向變化的初步探討

        【關鍵詞】  鉛;血清酶;逆向變化
        Primary study on  reverse changes of enzyme  activities in serum of leadpoisoned rat
        LI ShengLian, ZHOU YingQiong, SHI QingFeng,  LUO Yun,YANG Jun, OU ChaoYan, HUANG YuMei, CHEN Xiang, YING Xiang
        Department of Preventive Medicine, Department of Pathology, Department of Clinical Laboratory,Affiliated Hospital, Grade 2002, Department of Clinical Medicine, Guilin Medical College, Guilin 541004, China
        【Abstract】AIM:  To understand the mechanism underlying  the reverse changes of enzyme activity in serum of rat poisoned by lead. METHODS:  Female Wistar rats were randomly divided into 4 groups: control group treated with distilled water; lead groups treated with 10, 30 and 60 mg/kg PbAc2 , respectively,ip, once every 2 d, for 7 times. Subsequently, all animals were sacrificed for measuring the activity of ALT, AST, ALP, LDH and γGT in serum . The serum of rats treated with different concentration of PbAc2 (0, 30 and 300 μmol/L) was incubated in 37℃. Three hours later, the activities  of ALT,  AST, LDH, ALP and γGT in the serum were assayed. RESULTS: In vivo, compared with the control group, the activities of AST,γGT in serum were significantly higher,and the activity of ALP, LDH in serum were significantly lower (P<0.05), and the activities  of ALT in serum were significantly lower in 10 mg/kg Pb group (P<0.05). In the histopathological examination, no changes in liver  were found. Compared with that of the control group, in vitro, the activity of ALT in serum was significantly lower (P<0.05) and the activities  of LDH, ALP, AST and γGT in serum showed no significant inhibition.CONCLUSION: The mechanism of the reverse changes of enzyme activity in serum is due to the different degrees of activity inhibition by lead.
          【Keywords】lead;  seroenzyme, reversed changes
          【摘要】目的: 實驗研究鉛中毒以闡明血清酶活性逆向變化的機制. 方法: Wistar雌性大鼠隨機分為4組,對照組,對照組10, 30和60 mg/kg組. 醋酸鉛腹腔注射,隔天染毒1次,7次后處死動物,取血分離血清,測血清酶活性. 另分別向大鼠血清中加入醋酸鉛使其終濃度為0,30及300 μmol/L,37℃孵育3 h,測定血清酶活性. 結果: 體內實驗表明,隨染鉛劑量的增加,血清ALP與LDH活性變化呈下降趨勢(P<0.05);而γGT及AST活性變化呈上升趨勢(與對照組比較,P<0.05);ALT活性變化先下降(與對照組比較,P<0.05),而后隨鉛劑量的增加而呈上升趨勢. 體外實驗表明,鉛對ALT活性抑制較明顯(與對照組比較,P<0.05),而對LDH,ALP,AST及γGT活性未見有抑制作用. 結論: 鉛中毒所引起的部分血清酶活性逆向變化的機制是由于其活性受到鉛等因素不同程度的抑制所致.
          【關鍵詞】 鉛;血清酶;逆向變化
          引言
          當肝損害發生時,肝細胞中的血清谷丙轉氨酶(ALT),谷草轉氨酶(AST),乳酸脫氫酶(LDH),γ谷氨酰轉肽酶(γGT)等釋放到血液中,其活力升高,這稱為血清酶活性順向變化. 長期以來在該理論的指導下,血清酶活力的檢測成為了診斷肝損害的重要指標. 然而,有時也發現肝受損時血清酶的活性并非均升高,有時甚至會發生降低的現象,或無肝損害時,出現血清酶活性持續升高或減低的現象,這稱為血清酶活性逆向變化. 我們在研究鉛中毒時發現了這一現象,為此,作了初步的探討.  1材料和方法
          1.1材料醋酸鉛(AR.廣州化學試劑廠),血清ALT,AST,LDH,ALP及γGT活性測定試劑盒(上?迫A東菱診斷用品有限公司),全自動生化分析儀(東芝亞培,日本). 健康成年雌性Wistar大鼠65只,體質量(220±15) g,由廣西醫科大學實驗動物中心提供(SCXK桂20030003).
          1.2方法將動物隨機分為4組:對照組(蒸餾水,n=17), 低劑量鉛組(10 mg/kg,n=16),中劑量鉛組(30 mg/kg, n=16)和高劑量鉛組(60 mg/kg, n=16). 左下腹部以20 g/L碘酒消毒皮膚后,3個實驗組分別給予10, 30, 60 mg/kg體質量的乙酸鉛蒸餾水溶液,對照組給予相同容量的蒸餾水,隔天染毒1次,14 d后處死動物,測定各項血清酶指標及取肝組織做病理檢查. 另將對照組大鼠的血清混合后,分成3組(n=4),對照組加入蒸餾水,而實驗組加入醋酸鉛使其終濃度分別為: 0, 30及300 μmol/L. 37℃孵育120 min后,測定血清酶活性. 血清酶活性測定方法:ALT(IFCC法),AST(IFCC法), LDH(LP法), ALP(IFCC法)及γGT(IFCC法).
          統計學處理: 數據用x±s表示. 組間比較,方差齊時用方差分析,方差不齊時用秩和檢驗.
           2結果
          2.1體內試驗隨鉛劑量的增加,血清ALP和LDH活性而呈下降趨勢(與對照組比較,P<0.05),血清γGT及AST活性變化呈上升趨勢(與對照組比較,P<0.05),血清ALT活性變化先下降(與對照組比較,P<0.05),后隨鉛劑量的增加呈上升趨勢(表1).
          2.2體外試驗鉛對ALT活性抑制較明顯,而對LDH, ALP, AST及γGT活性未見有抑制作用(表2).
          2.3病理檢查各組肝細胞未見明顯的細胞變性或壞死.
          表1鉛中毒大鼠血清肝酶活性的變化(略)
          表2體外鉛對大鼠血清酶活性的影響(略)
          3討論
          血清酶活性作為診斷肝細胞損害的標志在毒理學、藥理學等研究及臨床應用已有很多年的歷史,為肝病的診斷立下了汗馬功勞. 然而近年有些報道表明血清酶活性有時不能準確反映肝細胞的損害,甚至有可能誤診. 導致該現象的原因是因為我們對血清酶活性的變化規律缺乏全面的認識.
          本研究表明,雖然光鏡下各組肝細胞未見明顯的形態病理學變化,但血清酶活性譜已呈現了多樣性的改變.已有人報道了與本研究相似的結果,如Todorovic等[1]報道血清ALP活性在大鼠鉛中毒時,比對照組低. 崔京偉等[2]發現TNT組血清ALT和AST活性明顯低于對照組. 韋耀東等[3]在觀察亞急性砷中毒對大白鼠部分生化指標影響時也發現血清ALT活性低于對照. 張香莉等[4]采用太安對大鼠灌胃染毒,結果表明太安對肝有一定的損害作用,血清AST活性升高,而ALT活性變化無統計學意義. 倪秀雄等[5]選S180荷瘤小鼠腹腔注射環磷酰胺,結果表明血清谷丙轉氨酶(ALT) 活性無顯著變化,而病理學檢查發現環磷酰胺引起肝細胞點狀及小灶性壞死,壞死區及匯管區炎性細胞浸潤.
          以上這些實驗顯示了中毒組血清酶活性發生了減低的現象,或即使肝細胞出現形態病理學變化,部分血清酶活性也未升高,這說明了血清酶活性逆向變化現象的發生絕非偶然.
          由于血清酶的活性可受酶含量、激活劑和抑制劑等因素的影響,而激活劑和抑制劑等因素應當是產生酶活性逆向變化現象最直接的因素,因此有些學者對此進行了研究. 如賈秀英等[6]發現當水中鎘離子濃度為32 mg/L, 64 mg/L時,鯽魚肝胰臟、腎臟和鰓的谷丙轉氨酶(GPT)和谷草轉氨酶(GOT)活性顯著降低. 體外試驗表明,鎘能直接抑制GPT、GOT的活性,而對Catalase活性不產生直接影響. 戴玉錦[7]也發現Na+, Ca2+, Mg2+等離子對ALT有激活作用,而Mn2+, Cu2+和Zn2+等離子則有抑制作用. 李勝聯等[8]報道新西蘭家兔血清ALT活性明顯受鉛的抑制. 為驗證鉛對本次實驗動物雌性Wistar大鼠血清酶類是否產生抑制作用,設計了體外試驗,結果表明鉛對血清ALT活性產生了抑制作用(P<0.05),而對血清ALP, AST, γGT和LDH活性未見有明顯的抑制作用(P>0.05),提示ALT活性比較容易受鉛的抑制. 與其他指標相比,血清ALT活性并非理想的鉛所致肝損害血清學診斷指標;而血清γGT及AST活性因其活性不易受鉛的抑制,故不易產生逆向變化,可以認為它們是較為理想的鉛所致肝損害血清學診斷指標. 除鉛等金屬離子影響血清酶活性外,機體內其他非金屬物質也可影響血清酶的活性,如劉耕陶[9]等發現使用Sy801可使小鼠血漿NO升高, ALT及AST活性水平下降,用硝基精氨酸抑制了NO水平,血漿中ALT, AST活性升高. 已有報道表明NO是大鼠血清ALT和AST活性強烈的抑制劑[10]. 本研究體內實驗中毒組血清ALP和LDH活性明顯下降(P<0.05),而體外實驗,血清ALP和LDH活性未見有鉛的抑制作用,提示可能存在另外的血清ALP和LDH酶活性逆向變化機制,即鉛中毒時血清NO是否升高?它們活性是否受NO等除鉛以外的因素抑制?這有待于進一步探討.
          致謝:桂林醫學院陽雨君老師.
          【參考文獻】
         。1]Todorovic T,  Vujanovic D. The influence of magnesium on the activity of some enzymes (AST,ALT,ALP) and lead content in some tissues[J]. Magnes Res, 2002,15:173-177.
         。2]崔京偉,常元勛,郭群等.大鼠枯否細胞活化與TNT肝毒性的關系[J]. 衛生毒理學雜志,2000,14(2):103-107.
         。3]韋耀東,鄧如平,陳婉蘭,等. 亞急性砷中毒對大白鼠部分生化指標影響[J]. 右江民族醫學院學報, 2004,26(5):631-632.
         。4]張香莉,劉亞杰,楊雪萍,等. 太安對大鼠血常規和肝功能的影響[J]. 中國工業醫學雜志,2003,16(1):35-36.
         。5]倪秀雄,姚琦,林秀珍,等. 環磷酰胺致S180荷瘤小鼠肝損傷機制的實驗研究[J].福建醫藥雜志,  2004,26(2):93-94.
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         。10]覃甲仁. NO含量與NOS活力對ALT與AST活力影響的研究[J]. 廣西醫科大學學報,1999,16(5):608-610.
           基金項目:廣西衛生廳青年科學基金(青99)
          (桂林醫學院: 預防醫學教研室, 病理解剖學教研室, 附屬醫院檢驗科, 2002級臨床醫療專業,廣西 桂林 541004)

        Tags: 鉛中毒,排鉛,鉛損傷,兒童鉛中毒,鉛超標,如何排鉛  
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